Lyso Tracker Red溶酶體熒光探針的使用
Lyso-Tracker Red基本信息
Lyso-Tracker Red是溶酶體紅色熒光探針，也屬于Bodipy染料家族成員之一，最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)是577/590 nm。由于結(jié)構(gòu)上有Bodipy的熒光基團(tuán)和弱堿基，同時(shí)具備一定的脂溶性，使得可以穿過(guò)細(xì)胞膜，選擇性地在酸性環(huán)境下聚集到溶酶體上，并發(fā)出紅色熒光，廣泛用來(lái)觀(guān)察溶酶體內(nèi)部生物合成及相關(guān)發(fā)病機(jī)理。
貨號(hào): ajcx12178
CAS: 231946-72-8
別名: Lyso Tracker Red DND-99;Bodipy 577/590;Lyso-Tracker Red
分子式: C20H24BF2N5O
分子量: 399.25
純度: >98%
溶解度:DMSO : 5 mg/mL (12.52 mM; Need ultrasonic)
儲(chǔ)存: Store at -20°C, protect from light
| 包裝（需要更多包裝請(qǐng)咨詢(xún)） | 價(jià)格（￥） | 純度 | 庫(kù)存 | 購(gòu)買(mǎi) |
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| 1mg | 700 | ＞98% | 現(xiàn)貨 | |
| 5mg | 3000 | ＞98% | 現(xiàn)貨 | |
| 10mg | 5500 | ＞98% | 現(xiàn)貨 |
實(shí)驗(yàn)原理
Lyso-Tracker Red是一種堿性熒光染料，它能夠在細(xì)胞內(nèi)的酸性環(huán)境下結(jié)合到溶酶體上。由于溶酶體內(nèi)的pH通常較低（約4.5-5.5），Lyso-Tracker Red能夠特異性與溶酶體內(nèi)的蛋白和脂類(lèi)結(jié)合，并發(fā)出紅色熒光。這使得細(xì)胞內(nèi)的溶酶體能夠通過(guò)熒光顯微鏡清晰可見(jiàn)，從而定量分析細(xì)胞溶酶體的數(shù)量、大小和活性等特征。
Lyso Tracker Red用來(lái)標(biāo)記溶酶體的實(shí)驗(yàn)步驟
1.配制儲(chǔ)備液：通常配制1mM作為儲(chǔ)備液，以1mg包裝為例，只需加入2.5mL的DMSO即為1mM，在溶解時(shí)可適當(dāng)水浴加熱，超聲以助溶。Lyso Tracker Red的工作液濃度比較稀，一般用50nM即可。
2.細(xì)胞處理：將要研究的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并在合適的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行處理，如對(duì)實(shí)驗(yàn)組添加藥物刺激。
3.細(xì)胞懸浮染色:（1）懸浮細(xì)胞：懸浮細(xì)胞經(jīng)4°C、1000g離心3-5分鐘，棄去上清液，使用PBS清洗兩次，每次5分鐘。（2）貼壁細(xì)胞：使用PBS清洗兩次，加入胰酶消化細(xì)胞，消化完成后經(jīng)1000g離心3-5min。（3）使用0.5-1mL工作液重懸約106個(gè)細(xì)胞，室溫避光孵育5-30分鐘。不同細(xì)胞最佳孵育時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求自行摸索。（4）孵育結(jié)束后，經(jīng)1000g離心5分鐘，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分鐘。（5）用預(yù)溫的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS重懸細(xì)胞，通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)觀(guān)察。
4.細(xì)胞貼壁染色:（1）在無(wú)菌蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸出過(guò)量的培養(yǎng)基，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）從蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）室溫避光孵育5-30分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。（5）孵育結(jié)束后吸棄染料工作液，用預(yù)溫的培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次。
染色效果示意圖如下：
(C，D）為有或沒(méi)有CQ(氯喹)（10μM）的ZAS( zymosan activation serum)4小時(shí)后，通過(guò)用Lyso-Tracker Red（酸性細(xì)胞內(nèi)區(qū)室的指示劑）染色，發(fā)現(xiàn)溶酶體的酸化受損。使用共聚焦顯微鏡獲得圖像，并使用Leica共聚焦軟件量化細(xì)胞中 Lyso-Tracker Red 的平均熒光強(qiáng)度。（E，F(xiàn)）從Lyso-Tracker Red染色后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析獲得的代表性直方圖表明，在含有ZAS有或沒(méi)有CQ（10μM）4小時(shí)后，細(xì)胞中的Lyso-Tracker Red信號(hào)和平均熒光強(qiáng)度降低。實(shí)際檢測(cè)效果會(huì)因?qū)嶒?yàn)條件、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，數(shù)據(jù)來(lái)源scientific reports,Article number: 8643 (2017).
