Bafilomycin A1(巴佛洛霉素 A1)自噬抑制實驗
基本信息
Bafilomycin A1（巴佛洛霉素A1）是一種大環內酯類抗生素，特異性，可逆的H+-ATPase（V-ATPase）抑制劑，IC50 值是 4-400 nmol/mg，在晚期也被用作自噬抑制劑。巴佛洛霉素A1阻斷自噬體-溶酶體融合，也可以抑制細胞溶酶體中的酸化和蛋白質降解，具有誘導調亡的作用 。
貨號：ajci19436
別名：NSC 381866；Bafilomycin A1；巴佛洛霉素A1；Baf-A1
CAS：88899-55-2
分子式：C35H58O9
分子量：622.84
溶解：二甲基亞砜：5 mg/ml
存儲：Store at -20°C
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體外研究
用Bafilomycin A1（巴佛洛霉素A1）處理不同類型的膜ATP酶，真菌（N.crassa）、植物（Z.mays）和動物（牛延髓）的液泡ATP酶,其I50為400 nmol/mg、4 nmol/mg和50 nmol/mg。I50值是指每毫克蛋白質中Bafilomycin A1的μmol，對ATP酶活性的抑制率為50%[1]
Bafilomycin A1通過抑制V-ATP酶依賴性酸化和CaP 60A/SERCA依賴性自噬體-溶酶體融合,破壞自噬通量[2]。
低濃度（1nm）時，能有效且特異地抑制和殺死pediatric B-cell急性淋巴細胞白血病細胞。針對自噬途徑的早期和晚期、線粒體為靶點，并誘導caspase非依賴性凋亡。Bafilomycin A1誘導Beclin 1與Bcl-2結合，進一步抑制自噬并促進凋亡細胞死亡[5]。
Bafiromycin A1阻礙BEL-7402肝細胞癌和HO-8910卵巢癌細胞系的生長，并抑制轉移潛能。透射電子顯微鏡和capsase-3和-9分析表明Bafilomycin A1誘導細胞凋亡[6]。
Bafilomycin A1可劑量依賴性地抑制多種培養細胞的生長，包括無論是否轉化的金黃地鼠胚胎和NIH-3T3成纖維細胞，以及PC12和HeLa細胞，其抑制細胞生長的IC50范圍為10至50 nM[7]
體內研究
低劑量Bafilomycin A1（0.1 mg/kg）略微慢性治療抑制腫瘤體積，但最終腫瘤體積與對照組無顯著差異。然而，與對照組相比，高劑量1 mg/kg慢性治療21天后顯著抑制腫瘤生長[8]
細胞實驗
使用0.05%胰蛋白酶收集細胞并懸浮在含有10%FCS的培養基中，并將200μL懸浮液添加到96孔板的每個孔中。細胞培養20小時以粘附。將Bafilomycin A1（巴佛洛霉素 A1） 添加到孔中，終濃度為 200、400 和 800 nM，一式三份。 在 24、48 和 72 小時，將 20 μl WST-1 添加到細胞中。 然后在 37°C 下孵育 4 小時，使用 675 nm 參比使用分光光度計讀取板，以確定 435 nm 處的光密度 (OD)。[2]
動物實驗
小鼠：將Tumor-bearing mice隨機分為三個實驗組：低劑量Bafilomycin A1（0.1 mg/kg/天）治療組（n=5）、高劑量巴佛洛霉素A1（1 mg/kg/天）治療組（n=5）和對照組（n=5）。測量腫瘤大小并計算腫瘤體積倍增時間[4]
質量檢測
由于Bafilomycin A1（巴佛洛霉素 A1）分子有58個氫，為了讓氫能更好裂分，我們采用氘代乙腈作溶劑，600MHz核磁共振波譜儀檢測樣品，從結果分析，樣品無雜質峰，58個氫歸屬及數量均正確，純度＞98%。
參考文獻
[1]. Haematologica. 2015 Mar;100(3):345-56.
[2]. Exp Ther Med. 2015 Nov;10(5):1829-1834.
[3]. Ohkuma S, et al. Inhibition of cell growth by bafilomycin A1, a selective inhibitor of vacuolar H(+)-ATPase. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1993 Nov;29A(11):862-6.
[4]. J Pathol. 1998 Jul;185(3):324-30.
[5]. Autophagy. 2015;11(8):1437-1438.
[6]. Haematologica. 2015;100(3):345-356.
[7]. J Biol Chem. 1991;266(26):17707-17712
[8]. Bowman EJ, et al. Bafilomycins: a class of inhibitors of membrane ATPases from microorganisms, animal cells, and plant cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(21):7972-7976.
[9].Antimicrob Agents Chemother. 1997;41(1):212-214.
